Citometría de flujo

Principios, fundamentos y aplicaciones en investigaciones y en clínica.

El curso consiste en ofrecer una introducción a una de las técnicas más ricas con las que se cuenta en el campo de la biología celular. La citometría de flujo se presenta como una herramienta potente a la hora de ofrecer datos sobre identidad y procesos celulares. Mediante este curso intentaremos ofrecer información sobre sus fundamentos y aplicaciones, con el objetivo de incorporarla como una posibilidad más a la hora de diseñar estrategias experimentales.

Objetivos

Objetivo general

  • Adquirir los fundamentos teóricos y las capacidades necesarias para desarrollar estudios basados en citometría de flujo e interpretar los datos que genera un citómetro. Adquirir conocimientos generales respecto a los campos de aplicación de la citometría de flujo tanto en clínica como en investigación.

Objetivo específico

  • Comprender las generalidades respecto a las partes componentes de los equipos así como los fundamentos de la técnica. Conocer las aplicaciones de la citometría de flujo tanto a la inmunología básica como a la clínica en general y en la clínica oncohematológica en particular. Adquirir conocimientos básicos sobre el manejo de programas computacionales de adquisición y análisis de datos de citometría de flujo.

Destinatarias/os

Estudiantes del Doctorado en Ciencias Médicas de la UNR y de otros doctorados afines. Médicos, Lic. en Biotecnología, Lic. en Biología, Bioquímicos.

Modalidad

Duración total 40 horas. Todos los jueves de 16:30 a 19 h. Modalidad virtual.

Fecha de inicio

2/9/2021

Cuerpo docente

  • Dra. Natalia Santucci
  • Dra. Ana Rosa Pérez
  • Dra. Silvina Villar
  • Dr. Andrés Alloatti
  • Dra. Ma. Alejandra Ensinck
  • Dra. Carolina Mahuad

Costos y formas de pago

$16000

Contacto

santucci@idicer-conicet.gob.ar

Temario del curso

  • Citómetros de flujo y separadores. Generalidades respecto a las partes componentes de los equipos.
  • Fundamentos de la técnica: Dispersión de luz, fluorescencia y fluoróforos. Dispersión y absorción de luz, fluorescencia, espectros de absorción y emisión, quenching, bleaching, FRET, conjugados en tandem. Marcadores vs. sondas. Citometría de flujo con y sin anticuerpos.
  • Sistema óptico: Sistemas de iluminación: lásers, lámparas, diodos. Punto de iluminación. Sistemas multiestación. Colección de luz. Filtros de interferencias, dicroicos, grillas. Detectores, fotomultiplicadores y fotodiodos.
  • Fluídica y transporte de muestras: “Sheath fluid”. Flujo laminar e hidroenfocado. Celdas de flujo. Sistemas de presión diferencial y volumétricos. Sistemas de alta velocidad. Sistemas capilares. Sistemas de fluídica para sorting y para análisis.
  • Sistemas de Electrónica; Transformación/amplificación de la señal. Análisis de pulso; altura, ancho, área. Umbrales, ganancias, amplificación y transformación logarítmica. Conversión analógico digital (ADC) y procesamiento digital. Citómetros digitales vs. analógicos.
  • Sistemas de software para procesamiento de datos: Software de operación y de análisis. Formato estándar de citometría de flujo (FCS) modo lista. Software de compensación, análisis de ratios y de transformación de datos. Estrategias de análisis de datos con los diferentes programas disponibles.
  • Separadores: Descripción breve e ilustrativa de separadores comerciales
  • Aplicaciones de la citometría de flujo en la inmunología básica y en la clínica. Diferenciación leucocitaria. Subpoblaciones linfocitarias. Estudio de sangre periférica, ganglios normales y médula ósea normal. Inmunodeficiencias primarias y secundarias. La citometría en el estudio de mecanismos bioquímicos y celulares: Ciclo celular. Proliferación celular. Apoptosis. Proteínas intracelulares. Citocinas intracelulares y plasmáticas. Ensayos funcionales. Citotoxicidad por células. Fagocitosis. Daño celular (ROS). Aplicaciones microbiológicas.
  • Diseño experimental de un ensayo de citometría de flujo. Sesiones de tipo tutorial en el uso y aplicaciones de software de análisis.
  • Aplicaciones de la citometría de flujo en la clínica hematológica. Aspectos relacionados con el laboratorio hematológico. Obtención de la muestra. Transporte/cuidados de integridad de la muestra. Expresión antigénica en hematopoyesis normal. Diagnóstico y seguimiento de neoplasias hematológicas. Inmunofenotipificación de Leucemias Agudas Linfomas No Hodgkin. Neoplasias de células plasmáticas. Leucemia Linfática Crónica. Enfermedad mínima residual.